A pesar del agobio, estrés y cansancio, hemos podido sobrevivir este segundo viaje!!
Por fin vacaciones de semana santa, toca desconectar y cargar pilas, para el próximo trimestre...!
(De la serie Grey´s anatomy)
Práctica 41: Prueba de mezcla con plasma normal. (PXLV)(B3).
Fecha: 13-3-15
El resultado ha sido 80 segundos
Prueba de mezcla con plasma normal
Introducción:
Las pruebas de mezclas se realizan cuando alguno de los tiempos determinados en el plasma problema está alargado. Para llevarlas a cabo se mezclan, a partes iguales, el plasma problema y un plasma o un suero que se sabe que es normal.
Material:
-Una gradilla.
-Cubetas de coagulómetro.
-Trocitos de acero para las cubetas de coagulómetro.
-Un rotulador de vidrio.
-Una micropipeta de 100microlitros.
-Un coagulómetro.
-Un baño de agua ajustable a 37ºC.
-Tubos de ensayo de plástico.
Reactivos:
-Solución de cloruro cálcico 0,025M
-Una cefalina activada con ácido elágico.
-Un pool de plasmas normales o plasma control.
Muestra:
-Un plasma pobre en plaquetas.
Fundamento:
La prueba de mezcla con plasma normal se practica, generalmente, cuando en el plasma problema se determina un TP normal y un TTPA alargado. En estas circunstancias se supone que el paciente sufre un déficit de algún factor de la vía intrínseca.
Procedimiento:
1. Diluir la muestra problema con un pool de plasmas normales 1/2 (100microlitros muestra + 100microlitros control) e introducirla en un tubo de ensayo de plástico correctamente identificado(MD, muestra diluida).
2. Incubar la dilución preparada en el baño a 37ºC durante 15 minutos.
3.Rotular dos tubos de ensayo de plásctico y depositarles las cantidades que posteriormente usaremos:
-1º: CaCl2.
-2º. CA, cefalina activada.
4. Atemperar los reactivos a 37ºC durante 5 minutos.
5. Verter 100microlitros de la dilución en una cubeta de coagulómetro identificada como M.
6. Añadir 100microlitros de cefalina activada a la cubeta.
7. Incubar la mezcla a 37ºC durante 2 minutos.
8. Medir el tiempo de coagulación añadiendo 100microlitros de CaCl2.
Lectura de los resultados:
El resultado ha sido 80 segundos
Los valores normales oscilan entre 30 y 40 segundos.
Práctica 40: Determinación funcional del fibrinógeno.(PXLII)(B3).
Fecha: 9-3-15
3. Depositar 0,2mL de cada dilución en cubetas de coagulómetro e identificarlas correctamente.
4. Añadir 20 microlitros de R3 a cada cubeta de coagulómetro y atemperar a 37ºC durante cinco minutos, también añadir un trocito de hierro a cada cubeta.
5.Importante, el R1 no se atempera.
6. Añadir 100 microlitros de R1 y medir el tiempo en el que se forma el coágulo en cada cubeta.
Determinación funcional del fibrinógeno.
Introducción:
El fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se trasnforma en fibrina. El tiempo de formación del coágulo es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno presente en la muestra de plasma.
Material:
-Una gradilla.
-Un coagulómetro.
-Tubos de ensayo de plástico.
-Una pipeta de vidrio graduada de 1ml y otra de 2ml.
-Una micropipeta capaz de dispensar 100 y 200 microlitros.
-Rotulador de vidrio.
-Cubetas de coagulómetro.
-Hierrecitos para coagulómetro.
-Un bolígrafo y papel milimetrado.
Reactivos:
-Trombina bobina (R1).
-Tampón imidazol (R2).
-Solución caolín (R3).
-Plasma control.
-Agua destilada.
Muestra:
-Plasma pobre en plaquetas.
Fundamento:
-La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss. En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.
Procedimiento:
1.Rotular los tubos de plástico:
-1º: MD, muestra diluida.
-2º: 1/5, dilución 1/5.
-3º: 1/10, dilución 1/10.
-4º: 1/20, dilución 1/20.
-5º: 1/30, dilución 1/30.
-6º: 1/40, dilución 1/40.
2. Preparar una dilución de la muestra 1/10 y los controles en tampón imidazol: 50microlitros de muestra + 450microlitros de tampon imidazol.
3. Preparar las siguientes diluciones del calibrados en tampón imidazol:
3. Depositar 0,2mL de cada dilución en cubetas de coagulómetro e identificarlas correctamente.
4. Añadir 20 microlitros de R3 a cada cubeta de coagulómetro y atemperar a 37ºC durante cinco minutos, también añadir un trocito de hierro a cada cubeta.
5.Importante, el R1 no se atempera.
6. Añadir 100 microlitros de R1 y medir el tiempo en el que se forma el coágulo en cada cubeta.
Lectura de los resultados:
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